產品及特點:
1. 產品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據伴放線放線桿菌保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
產品名稱 | 鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Mycobacterium avium subspecies paratuberculosisPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
運輸及保存:
鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,產品僅用于科研只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加):
乙酸鉀/醋酸鉀/Potassium acetateAR,92%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,127-08-2RT
草酸氫鉀/乙二酸氫鉀/重草酸鉀/酸性草酸鉀/乙二酸單鉀鹽/Potassium hydrogen oxalateCP,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,127-95-7RT
酒石酸氫鉀/重酒石酸鉀/酸性酒石酸鉀/酒石酸鉀/2,3-二羥基-(R-(R*,R*))-丁二酸單鉀鹽/L(+)-酒石酸氫鉀/L-酒石酸鹽氫鉀/L-酒石酸氫鉀/Potassium hydrogen tartrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,868-14-4RT
檸檬酸鉀/枸櫞酸鉀/檸檬酸三鉀/2-羥基-1,2,3-丙三羧酸三鉀鹽/Potassium citrate monohydrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:6100-05-6RT
甲酸鉀/蟻酸鉀/Potassium formateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,590-29-4RT
油酸鉀/十八碳烯酸鉀/(Z)-9-十八烯酸鉀鹽/十八烯酸鉀/Potassium oleateCP250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,143-18-0RT
草酸鉀/乙二酸鉀/草酸二鉀一水合物/Potassium oxalate monohydrateAR,99.8%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6487-48-5RT
硬脂酸鉀/十八酸鉀/Potassium stearateCP,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,593-29-3RT
四草酸鉀/四乙二酸鉀/草酸三氫鉀/二草酸三氫鉀/三氫二草酸鉀二水合物/Potassium tetraoxalate dihydrateCP,99.5%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6100-20-5RT
草酸鈦鉀/乙二酸鈦鉀/雙草酸氧化鈦(IV)酸鉀二水合物/Potassium titanyl oxalate dihydrateAR,98.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,14402-67-6RT
四苯硼鉀/四苯硼化鉀/四苯基硼酸鉀/Potassium tetraphenylborateCP,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3244-41-5RT
亞碲酸鉀/碲(IV)酸鉀/亞蒂酸鉀/Potassium telluriteCP,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7790-58-1RT
丁二酮肟/二甲基乙酰肟/丁二酮二肟/二乙二肟/丁二肟/雙乙酮肟/鎳試劑/二乙酰二肟/二甲基乙二醛肟/二甲基乙二肟/2,3-丁二酮二肟/DimethylglyoximeAR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,95-45-4RT
二乙酰一肟/2,3-丁二酮一肟/聯乙酰一肟/雙乙酰一肟/甲基肟乙基甲酮/丁二酮單肟/2,3-丁二酮肟/2,3-丁烷二酮一肟/肟乙基甲酮/丁二酮一肟/二甲基乙二酰一肟/Diacetyl monoximeAR10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,57-71-6RT
鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒2-Chloro-6-fluorobenzyl chloride 質量規格:HPLC≥98%,標準品
Helicid 質量規格:HPLC≥97%,標準品
1-(5-Bromo-2-methoxy-phenyl)adamantane 質量規格:HPLC≥98%,標準品
POLYETHYLENE GLYCOL MONOOLEYL ETHER 質量規格:HPLC≥98%,標準品
3-Bromo-2-chlorothiophene 質量規格:HPLC≥98%,標準品
BASF PALAMOLL 646 質量規格:色價E(1%)=150;紅花黃色素含量>95%
Chondroitin sulfate 質量規格:HPLC≥98%,標準品
Methyl 2-(methylamino)benzoate 質量規格:≥98%,BR
技術特點:
1產品僅用于科研準確可靠,臨床雙盲對照試驗>1000例,結果與金標準測序法比對,結果*性大于99%。
2高靈敏:可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3快速:整個檢測流程只需3小時。
4簡便:試劑盒提供預混好的試劑,使體系配置操作簡便。
5防污染
6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對,才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對,在延伸中產生熒光。
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